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皖儀液相色譜對(duì)2025年版《中國藥典》公示稿中穩(wěn)心顆粒的檢測(cè)

方案概述

前言：

穩(wěn)心顆粒是我國批準(zhǔn)的第一個(gè)治療心律失常的專利中成藥新藥，現(xiàn)為國家基本藥物目錄、國家醫(yī)保品種目錄、中國藥典收錄品種。穩(wěn)心顆粒主要是由黨參、黃精、三七、琥珀、甘松等組成，黨參、黃精可以益氣養(yǎng)陰，三七活血化瘀通絡(luò)，琥珀可以鎮(zhèn)心安神，甘松理氣止痛，這些藥物一起應(yīng)用可以使患者氣陰兩虛得以滋養(yǎng)，血脈瘀阻可以得到通暢。常用于治療氣陰兩虛，心脈瘀阻所致的心悸不寧，氣短乏力，胸悶胸痛，室性早搏，房性早搏等。據(jù)最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于穩(wěn)心顆粒國家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂草案的公示》，新標(biāo)準(zhǔn)草案修訂了2020版藥典含量測(cè)定的梯度洗脫方法，含量限度未作修改。

本篇文章參考了最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于穩(wěn)心顆粒國家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂草案的公示》中修訂的含量測(cè)定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測(cè)器對(duì)穩(wěn)心顆粒進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1色譜峰的理論塔板數(shù)均高于4000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，三七皂苷R1的保留時(shí)間RSD值為0.125%，峰面積RSD值為0.499%，人參皂苷Rg1的保留時(shí)間RSD值為0.126%，峰面積RSD值為0.198%，人參皂苷Rb1的保留時(shí)間RSD值為0.165%，峰面積RSD值為0.300%，重復(fù)性較好。三七皂苷R1檢出限為0.210μg/mL，定量限為0.699μg/mL，人參皂苷Rg1檢出限為0.220μg/mL，定量限為0.733μg/mL，人參皂苷Rb1檢出限為0.399μg/mL，定量限為1.329μg/mL。取穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）作為測(cè)試樣品，根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對(duì)穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品每袋含三七以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總量為44.478mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中不得少于17.0mg的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對(duì)穩(wěn)心顆粒的檢測(cè)需求。

關(guān)鍵詞：穩(wěn)心顆粒；高效液相色譜法；紫外檢測(cè)器；含量測(cè)定。

1.實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器配置

表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

序號(hào)	名稱	數(shù)量
1	LC3200系列高效液相色譜儀	1
2	P3200B二元高壓梯度泵	1
3	UV3200 紫外-可見光檢測(cè)器	1
4	CT3200全溫度柱溫箱	1
5	AS3200全自動(dòng)進(jìn)樣器	1

1.2 實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品；

人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品；

人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品;

甲醇：色譜純；

乙腈：色譜純；

分析天平；

微孔濾膜：孔徑0.22μm；

超聲波清洗機(jī)。

1.3 測(cè)試條件

表2 色譜條件清單

色譜條件清單
色譜柱	諾譜C18色譜柱
流速	1 mL/min
柱溫	30℃
檢測(cè)波長	203 nm
進(jìn)樣量	10 μL
流動(dòng)相A	乙腈
流動(dòng)相B	水

表3 梯度洗脫程序表

時(shí)間 / min	A / %	B / %
0	16	84
12	19	81
35	24	76
38	28	72
60	31	69
70	43	57

1.4 溶液配制

1.4.1 80%甲醇

精確量取80mL甲醇，置于100mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻即可。

1.4.2對(duì)照品溶液

取三七皂苷R1對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加 80%甲醇制成每1ml 含三七皂苷R1 0.04mg、人參皂苷Rg1 0.15mg、人參皂苷Rb1 0.10mg 的混合溶液，搖勻，即得。

1.4.3對(duì)照品檢出限溶液

精密吸取對(duì)照品溶液1mL，置于50mL容量瓶中，加入80%甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性

圖1 對(duì)照品溶液（20μg/mL）色譜圖

表4系統(tǒng)適用性溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間（min）	峰面積	理論塔板數(shù)
三七皂苷R1	28.055	155.128	77886
人參皂苷Rg1	32.464	580.368	95910
人參皂苷Rb1	63.742	223.801	233391

說明：由上述譜圖可見，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1色譜峰的理論塔板數(shù)均高于4000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。

2.2 重復(fù)性

圖2 對(duì)照品溶液中三七皂苷R1重復(fù)性色譜圖

表5 對(duì)照品溶液中三七皂苷R1重復(fù)性色譜參數(shù)

序號(hào)	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)
1	28.055	155.128	77886
2	28.100	155.292	78165
3	28.004	155.409	77287
4	28.066	156.838	77976
5	28.089	156.117	78408
6	28.038	156.852	78091
平均	28.059	155.939	N/A
RSD(%)	0.125	0.499	N/A

圖3 對(duì)照品溶液中人參皂苷Rg1重復(fù)性色譜圖

表6 對(duì)照品溶液中人參皂苷Rg1重復(fù)性色譜參數(shù)

序號(hào)	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)
1	32.464	580.368	95910
2	32.516	581.088	96527
3	32.405	581.141	95198
4	32.481	583.072	95988
5	32.489	582.906	96954
6	32.428	582.724	96664
平均	32.464	581.883	N/A
RSD(%)	0.126	0.198	N/A

圖4 對(duì)照品溶液中人參皂苷Rb1重復(fù)性色譜圖

表7對(duì)照品溶液中人參皂苷Rb1重復(fù)性色譜參數(shù)

序號(hào)	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)
1	63.742	223.801	233391
2	63.778	223.849	233251
3	63.487	224.617	234838
4	63.698	225.321	238334
5	63.645	224.294	235905
6	63.604	225.298	239222
平均	63.659	224.530	N/A
RSD(%)	0.165	0.300	N/A

說明：對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，三七皂苷R1的保留時(shí)間RSD值為0.125%，峰面積RSD值為0.499%，人參皂苷Rg1的保留時(shí)間RSD值為0.126%，峰面積RSD值為0.198%，人參皂苷Rb1的保留時(shí)間RSD值為0.165%，峰面積RSD值為0.300%，重復(fù)性較好。

2.3 檢出限

圖5 對(duì)照品檢出限溶液色譜圖

表8 對(duì)照品檢出限溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)	信噪比	檢出限（μg/mL）	定量限（μg/mL）
三七皂苷R1	28.048	2.854	76024	11.452	0.210	0.699
人參皂苷Rg1	32.403	10.481	97738	40.929	0.220	0.733
人參皂苷Rb1	63.697	4.913	278322	15.044	0.399	1.329

說明：以信噪比（S/N）為3確定檢出限（LOD），三七皂苷R1檢出限為0.210μg/mL，人參皂苷Rg1檢出限為0.220μg/mL，人參皂苷Rb1檢出限為0.399μg/mL。以信噪比（S/N）為10確定定量限（LOQ），三七皂苷R1定量限為0.699μg/mL，人參皂苷Rg1定量限為0.733μg/mL，人參皂苷Rb1定量限為1.329μg/mL。

2.4 樣品測(cè)試

取穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 80%甲醇 25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率 500W，頻率 40kHz）45分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用 80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取供試品溶液 10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。

圖6 穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品色譜圖

表9 穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品各色譜峰色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)	濃度（μg/mL)	每袋含量（mg)
三七皂苷R1	28.014	137.763	78759	35.338	44.478
人參皂苷Rg1	32.412	563.536	96856	145.270
人參皂苷Rb1	63.599	393.408	232760	175.214

注：穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）每袋5g。

說明：根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對(duì)穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品每袋含三七以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總量為44.478mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中不得少于17.0mg的要求。

2.5 注意事項(xiàng)

在制備相關(guān)溶液時(shí)需要注意佩戴好實(shí)驗(yàn)室防護(hù)用品。

3.結(jié)論

本篇文章參考了最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于穩(wěn)心顆粒國家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂草案的公示》中修訂的含量測(cè)定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1色譜峰的理論塔板數(shù)均高于4000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，三七皂苷R1的保留時(shí)間RSD值為0.125%，峰面積RSD值為0.499%，人參皂苷Rg1的保留時(shí)間RSD值為0.126%，峰面積RSD值為0.198%，人參皂苷Rb1的保留時(shí)間RSD值為0.165%，峰面積RSD值為0.300%，重復(fù)性較好。三七皂苷R1檢出限為0.210μg/mL，定量限為0.699μg/mL，人參皂苷Rg1檢出限為0.220μg/mL，定量限為0.733μg/mL，人參皂苷Rb1檢出限為0.399μg/mL，定量限為1.329μg/mL。取穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）作為測(cè)試樣品，根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對(duì)穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，穩(wěn)心顆粒（無蔗糖）樣品每袋含三七以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總量為44.478mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中不得少于17.0mg的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對(duì)穩(wěn)心顆粒的檢測(cè)需求。

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