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方案概述

前言：

氣相色譜技術(shù)在三七總皂苷中樹脂殘留物的檢測方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。三七總皂苷作為血栓通等心腦血管藥物的核心原料，其純化工藝普遍采用大孔吸附樹脂。但該過程會(huì)引入正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯等有害有機(jī)溶劑殘留。這些殘留物對(duì)人體具有潛在毒性，因此必須建立靈敏、準(zhǔn)確的檢測方法進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控。

本篇文章參考了最新版《中國藥典》，采用皖儀科技?xì)庀嗌V儀GC6100配置FID檢測器搭配全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器對(duì)三七總皂苷樣品中樹脂殘留進(jìn)行檢測。

關(guān)鍵詞：三七總皂苷；溶劑殘留；氣相色譜；FID檢測器；頂空。

1.實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器配置

皖儀科技GC6100氣相色譜儀

表1氣相色譜系統(tǒng)配置清單

序號(hào)	名稱	數(shù)量
1	GC6100氣相色譜儀	1
2	FID檢測器	1
3	全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器	1

1.2 實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

對(duì)照品：自購有證正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光密封冷藏;

N,N-二甲基甲酰胺；

載氣：高純氮?dú)猓?/span>

氫氣發(fā)生器；

空氣發(fā)生器；

全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器；

頂空瓶：玻璃頂空瓶（20mL）。

1.3 測試條件

1.3.1 頂空進(jìn)樣器參考條件

加熱平衡溫度：90℃；

加熱平衡時(shí)間：30min；

進(jìn)樣閥溫度：110℃；

傳輸線溫度：120℃；

進(jìn)樣體積：1.0mL（定量環(huán)）。

1.3.2 氣相色譜儀參考條件

色譜柱：FFAP毛細(xì)管色譜柱，30m×0.25mm×0.25μm；

程序升溫：柱初始溫度60℃，保持16分鐘，再以20℃/min速率升溫至200℃，保持2分鐘；

柱流量：1.0 mL/min；

進(jìn)樣口溫度：240℃；

檢測器溫度：300℃；

空氣流量：300mL/min；

氫氣流量：40mL/min;

尾吹流量：20mL/min;

分流進(jìn)樣：分流比2：1。

1.4 溶液配制

1.4.1 對(duì)照品貯備液；

精密稱取正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯、二乙烯苯對(duì)照品適量，加N,N-二甲基甲酰胺制成每1mL中分別含有20μg、4μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。

1.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液

精密吸取對(duì)照品貯備液2ml，置50ml量瓶中，加25%N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置20ml頂空瓶中，密封，即得。

1.4.3 檢出限測試標(biāo)準(zhǔn)溶液

精密吸取對(duì)照品貯備液2ml，置500ml量瓶中，加25%N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置20ml頂空瓶中，密封，即得。

2.結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)樣定性試驗(yàn)

圖1 空白溶劑色譜圖

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液色譜圖

表2 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間（min）	峰面積	理論塔板數(shù)	分離度
正己烷	2.052	92.903	9532	12.922
苯	3.136	12.547	22458	15.086
甲苯	4.270	52.145	65784	22.422
對(duì)二甲苯	6.178	47.608	56890	15.275
鄰二甲苯	8.011	37.963	55150	24.434
苯乙烯	12.151	26.830	57649	30.670
1，2-二乙基苯	17.152	39.951	307766	45.030
二乙烯苯-1	21.241	7.698	2149971	2.807
二乙烯苯-2	21.405	3.104	2095121	N/A

說明：由上述譜圖可見，各色譜峰之間能很好分離，分離度大于1.5，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。

2.2 重復(fù)性測試

圖3 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液重復(fù)性測試譜圖（n=5)

表3 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間RSD（%）	峰面積RSD（%）
正己烷	0.022	0.903
苯	0.017	0.898
甲苯	0.023	1.169
對(duì)二甲苯	0.027	0.926
鄰二甲苯	0.031	0.859
苯乙烯	0.021	0.967
1，2-二乙基苯	0.015	0.849
二乙烯苯-1	0.004	1.288
二乙烯苯-2	0.003	1.035

說明：混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液連續(xù)進(jìn)樣5針，峰面積的RSD≤1.5%。

2.3 檢出限

圖4 檢出限測試標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

表4 檢出限測試標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間（min）	峰面積	信噪比	檢出限（μg/mL）	定量限（μg/mL）
正己烷	2.056	6.895	669.459	0.36×10-3	1.19×10-3
苯	3.138	1.344	118.687	0.40×10-3	1.35×10-3
甲苯	4.273	5.321	562.650	0.42×10-3	1.42×10-3
對(duì)二甲苯	6.177	4.901	350.389	0.68×10-3	2.28×10-3
鄰二甲苯	8.010	4.023	219.546	1.09×10-3	3.64×10-3
苯乙烯	12.147	2.757	105.090	2.28×10-3	7.61×10-3
1，2-二乙基苯	17.150	4.221	251.686	0.95×10-3	3.18×10-3
二乙烯苯-1	21.243	0.902	111.438	2.15×10-3	7.18×10-3
二乙烯苯-2	21.408	0.374	45.794	5.24×10-3	1.75×10-2

說明：以信噪比（S/N）為3確定檢出限（LOD），以信噪比（S/N）為10確定定量限（LOQ），檢出限及定量限均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.4 樣品試驗(yàn)

分別精密稱取樣品約0.1g（0.1017g、0.1026g、0.1023g），置20ml頂空瓶中，精密加入25% N，N-二甲基甲酰胺溶液5ml，密封，搖勻，即得。

圖5 三份樣品溶液測試譜圖

圖6 樣品溶液與對(duì)照品溶液對(duì)比譜圖

說明：樣品中正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯均未檢出。

3.結(jié)論

本方法采用皖儀科技氣相色譜儀GC6100配置FID檢測器搭配全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器對(duì)三七總皂苷樣品中樹脂殘留進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各色譜峰之間能很好分離，分離度大于1.5，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。該方法的重復(fù)性、檢出限試驗(yàn)結(jié)果均符合要求，測試樣品中正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯均未檢出，結(jié)果正常。說明了該方法配備皖儀科技GC6100儀器滿足對(duì)三七總皂苷樣品中樹脂殘留的檢測需求。