方案概述
前言：
甲霜靈是一種苯基酰胺類，高效、低毒、內(nèi)吸性殺菌劑，對由霜霉菌、疫霉菌、腐霉菌等引起的霜霉病、疫霉病、黑脛病等多種作物病害具有優(yōu)異的治療作用，在黃瓜、番茄、馬鈴薯、葡萄、煙草等作物的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。甲霜靈主成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)是原料藥有效性的核心指標(biāo)，直接關(guān)系到最終制劑的藥效；2，6-二甲基苯胺作為合成過程中的關(guān)鍵中間體雜質(zhì)，其殘留水平可以反映出產(chǎn)品純度與工藝控制程度。為確保甲霜靈原料藥的質(zhì)量與安全性，對甲霜靈原料藥中主成分與2，6-二甲基苯胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行精確測定至關(guān)重要。
本篇文章參考了《中華人民共和國化工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 甲霜靈原料》（HG/T 2206-2015），采用皖儀科技?xì)庀嗌V儀GC6100配置FID檢測器對甲霜靈原料藥進(jìn)行檢測。
關(guān)鍵詞：甲霜靈；2，6-二甲基苯胺；氣相色譜；FID檢測器。
1.儀器配置
皖儀科技GC6100氣相色譜儀
表1 氣相色譜系統(tǒng)配置清單
|
序號 |
名稱 |
數(shù)量 |
|
1 |
GC6100氣相色譜儀 |
1 |
|
2 |
FID檢測器 |
1 |
|
3 |
ALS6100自動進(jìn)樣器 |
1 |
2.甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定試驗
2.1 實驗材料及輔助設(shè)備
丙酮；
甲霜靈標(biāo)樣，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.4%；
內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二戊酯；
載氣：高純氮氣；
氫氣發(fā)生器；
空氣發(fā)生器。
2.2 測試條件
氣相色譜儀參考條件
色譜柱：DB-1701毛細(xì)管色譜柱，30m×0.32mm×0.25μm；
柱溫：溫度200℃，保持20分鐘；
柱流量：2.0 mL/min；
進(jìn)樣口溫度：240℃；
檢測器溫度：300℃；
空氣流量：300mL/min；
氫氣流量：30mL/min；
尾吹流量：25mL/min；
分流進(jìn)樣：分流比30：1；
進(jìn)樣體積：1μL。
2.3 溶液配制
2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液
稱取4.0g鄰苯二甲酸二戊酯，置于500 mL容量瓶中，加適量丙酮溶解，并稀釋至刻度，搖勻即可。
2.3.2 標(biāo)樣溶液
稱取甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)品0.1019g，置于一具塞玻璃瓶中，用移液管加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。
2.3.3 試樣溶液
稱取甲霜靈原料藥0.1015g，置于一具塞玻璃瓶中，用移液管加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。
2.4 結(jié)果與討論
2.4.1 標(biāo)樣定性試驗
圖1 鄰苯二甲酸二戊酯色譜圖
圖2 甲霜靈標(biāo)樣溶液色譜圖
表1 甲霜靈標(biāo)樣溶液色譜參數(shù)
|
化合物名 |
保留時間（min） |
理論塔板數(shù) |
峰面積 |
|
甲霜靈 |
8.542 |
28953 |
4193.944 |
|
鄰苯二甲酸二戊酯 |
14.457 |
26368 |
4177.044 |
說明：由上述譜圖可見，甲霜靈和鄰苯二甲酸二戊酯色譜峰之間能很好分離，滿足實驗分析需求。
2.4.2 樣品測試
圖3 甲霜靈標(biāo)樣溶液重復(fù)進(jìn)樣測試譜圖（n=2)
表2 甲霜靈標(biāo)樣溶液重復(fù)測試數(shù)據(jù)
|
序號 |
組分 |
峰面積 |
|
1 |
甲霜靈 |
4204.259 |
|
2 |
4193.944 |
|
|
平均 |
N/A |
4199.102 |
|
RSD（%） |
N/A |
0.174 |
|
1 |
鄰苯二甲酸二戊酯 |
4188.028 |
|
2 |
4177.044 |
|
|
平均 |
N/A |
4182.536 |
|
RSD（%） |
N/A |
0.186 |
甲霜靈標(biāo)樣溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣2次，相鄰兩針甲霜靈的峰面積RSD為0.174%，內(nèi)標(biāo)物的峰面積RSD為0.186%，滿足標(biāo)準(zhǔn)中RSD小于1.2%的要求，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。
圖4 甲霜靈標(biāo)樣溶液測試譜圖
圖5 甲霜靈原料藥試樣溶液測試譜圖
將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中甲霜靈與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比分別進(jìn)行平均。試樣中甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)按照下列計算公式進(jìn)行計算。
w1=（r2×m1×w）/（r1×m2）
w1：試樣中甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；
r2：試樣溶液中甲霜靈與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；
m1：標(biāo)樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；
w：標(biāo)樣中甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；
r1：標(biāo)樣溶液中甲霜靈與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；
m2：試樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。
表3 甲霜靈試驗測試數(shù)據(jù)
|
名稱 |
甲霜靈峰面積 |
鄰苯二甲酸二戊酯峰面積 |
峰面積比均值 |
試樣中甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1 |
|
標(biāo)樣溶液 |
4193.944 |
4177.044 |
1.00327 |
97.9% |
|
4199.050 |
4188.572 |
|||
|
試樣溶液 |
4183.911 |
4254.599 |
0.98381 |
|
|
4158.406 |
4225.010 |
說明：計算可得試樣中甲霜靈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.9%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求（≥95.0%）。
3.2，6-二甲基苯胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定試驗
3.1實驗材料及輔助設(shè)備
丙酮；
2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.5%；
內(nèi)標(biāo)物：正十二烷；
載氣：高純氮氣；
氫氣發(fā)生器；
空氣發(fā)生器。
3.2 測試條件
氣相色譜儀參考條件
色譜柱：DB-1701毛細(xì)管色譜柱，30m×0.32mm×0.25μm；
程序升溫：柱箱溫度80℃，以5℃/min的速率升至120℃，保持2分鐘，再以30℃/min的速率升至250℃，保持5分鐘；
柱流量：2.0 mL/min；
進(jìn)樣口溫度：260℃；
檢測器溫度：300℃；
空氣流量：300mL/min；
氫氣流量：30mL/min；
尾吹流量：25mL/min；
分流進(jìn)樣：分流比5：1；
進(jìn)樣體積：2μL。
3.3 溶液配制
3.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液
稱取0.025 g正十二烷，置于500 mL容量瓶中，加適量丙酮溶解，并稀釋至刻度，搖勻即可。
3.3.2 標(biāo)樣溶液
稱取2，6-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品0.0529g，置于100mL容量瓶中，加入丙酮振搖使之溶解，并用丙酮稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液1mL，置于一具塞玻璃瓶中，加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。
3.3.3 試樣溶液
稱取甲霜靈原料藥0.2535g，置于一具塞玻璃瓶中，用移液管加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。
3.4 結(jié)果與討論
3.4.1 標(biāo)樣定性試驗
圖6 正十二烷色譜圖
圖7 2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液色譜圖
表4 2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液色譜參數(shù)
|
化合物名 |
保留時間（min） |
理論塔板數(shù) |
峰面積 |
|
正十二烷 |
6.673 |
95901 |
330.012 |
|
2，6-二甲基苯胺 |
9.218 |
138007 |
293.605 |
說明：由上述譜圖可見，正十二烷和2，6-二甲基苯胺色譜峰之間能很好分離，滿足實驗分析需求。
3.4.2 樣品測試
圖8 2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液重復(fù)進(jìn)樣測試譜圖（n=2)
表5 2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液重復(fù)測試數(shù)據(jù)
|
序號 |
組分 |
峰面積 |
|
1 |
正十二烷 |
330.119 |
|
2 |
330.012 |
|
|
平均 |
N/A |
330.066 |
|
RSD（%） |
N/A |
0.023 |
|
1 |
2，6-二甲基苯胺 |
293.919 |
|
2 |
293.605 |
|
|
平均 |
N/A |
293.762 |
|
RSD（%） |
N/A |
0.076 |
2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣2次，相鄰兩針內(nèi)標(biāo)物的峰面積RSD為0.023%，2，6-二甲基苯胺的峰面積RSD為0.076%，滿足標(biāo)準(zhǔn)中RSD小于1.2%的要求，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。
圖9 2，6-二甲基苯胺標(biāo)樣溶液測試譜圖
圖10 甲霜靈原料藥試樣溶液測試譜圖
將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中2，6-二甲基苯胺與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比分別進(jìn)行平均。試樣中2，6-二甲基苯胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)按照下列計算公式進(jìn)行計算。
w2=（r2×m1×w）/（r1×m2×n）
w2：試樣中2，6-二甲基苯胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；
r2:試樣溶液中2，6-二甲基苯胺與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；
m1：標(biāo)樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；
w：標(biāo)樣中2，6-二甲基苯胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；
r1：標(biāo)樣溶液中2，6-二甲基苯胺與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；
m2：試樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；
n: 稀釋因子，n=100。
表6 甲霜靈試驗測試數(shù)據(jù)
|
名稱 |
2，6-二甲基苯胺峰面積 |
正十二烷峰面積 |
峰面積比均值 |
試樣中2，6-二甲基 苯胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1 |
|
標(biāo)樣溶液 |
293.605 |
330.012 |
0.88532 |
0.006% |
|
294.368 |
334.142 |
|||
|
試樣溶液 |
0.968 |
364.609 |
0.0263 |
|
|
0.948 |
363.218 |
說明：計算可得試樣中2，6-二甲基苯胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.006%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求（≤0.1%）。
4.結(jié)論
本次測試采用皖儀科技?xì)庀嗌V儀GC6100配置FID檢測器分別對甲霜靈原料藥樣品中甲霜靈和2，6-二甲基苯胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果顯示，甲霜靈和鄰苯二甲酸二戊酯色譜峰之間以及2，6-二甲基苯胺和正十二烷之間均能很好分離，滿足實驗分析需求。經(jīng)公式計算可得，試樣中甲霜靈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.9%，2，6-二甲基苯胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.006%，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。說明了該方法配備皖儀科技GC6100儀器滿足對甲霜靈原料藥的檢測需求。
5.注意事項
5.1 實驗操作時應(yīng)按規(guī)定要求佩戴實驗室防護(hù)用品，并在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的環(huán)境下進(jìn)行；
5.2 標(biāo)品、樣品使用后應(yīng)及時密封保存，樣品于通風(fēng)、干燥、陰涼處避光儲存，標(biāo)品于2-8℃條件下保存。
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